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Walker256癌肉瘤细胞复苏与传代

发布时间:2015-08-07 10:46 |  点击次数:

                                             Walker256复苏与传代

  • 细胞复苏:
  • 在液氮中取出冻存管
  • 置于39℃水浴中,迅速溶化
  • 用2ml注射器吸取细胞悬液,注射到Wistar大鼠腹腔中
注意事项:
1.准备1只雌性大鼠,100-110g(120g以上的大鼠很难有腹水)
2.待第7天左右开始密切观察大鼠的腹水及存活情况,如果活力佳,有明显移动性腹水,可以放腹水2次左右;一旦发现大鼠活动受限,要立即处死取腹水;
3.一般每次可以收取20-60ml(甚至更多)。
 
二、 腹水采集与传代分成两类:活着抽取腹水和处死抽取腹水
大鼠对不同杂交瘤细胞的敏感性不同,有的注射后两周即死亡,walker256腹水鼠一般20天左右死亡,有的会出现血性腹水,以下供参考:
制备大鼠腹水流程:
1.活着抽取腹水
1) 将walker256腹水鼠用灌胃的姿势固定好(左手固定)
2) 酒精消毒整个腹水鼠腹部
3) 右手拿20ml注射器针管加1ml注射器针头插入walker256腹水鼠腹腔内(在腹部中线旁刺入空隙,勿扎住内脏)
4) 抽取腹水
5) 用灭菌生理盐水稀释腹水,细胞计数器计数,使细胞总数在1×107个/ml
6) 如果是传代室温放置就行,要是接瘤必须准备碎冰盒,把要接瘤的腹水放置在碎冰盒里面
 
2.处死抽取腹水
1)将walker256腹水鼠脱臼处死,75%酒精棉球将腹部消毒
2)用已灭菌的眼科剪,剪开腹部皮层(只剪皮层,不剪肌肉层)
3)暴露腹部肌肉,将walker256腹水鼠用灌胃的姿势固定好(左手固定)
4) 右手拿20ml注射器针管加1ml注射器针头插入walker256腹水鼠腹腔内(在腹部中线旁刺入空隙,勿扎住内脏)
5) 抽取腹水
6)用灭菌生理盐水稀释腹水,细胞计数器计数使细胞总数在1×107个/ml
7)如果是传代室温放置就行,要是接瘤必须准备碎冰盒,把要接瘤的腹水放置在碎冰盒里面
 
注意事项:
每次取腹水的时候,可以观察一下:
1.腹水收集少的大鼠,肠壁、内脏和腹壁上是否有实体瘤,如果有说明注射方式和细胞数目还是有问题;
2. 收集的是血性腹水(红色)还是非血性腹水(黄色),一般血性腹水的产量低。这和杂交瘤的种类和注射有关。
3.可以仔细观察大鼠注射杂交瘤后的存活期和腹水产量,实体瘤产生、血性腹水之间的关系。
 
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