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中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NΑP)

发布时间:2014-10-13 10:09 |  点击次数:

细胞化学染色液套组使用说明书

【产品型号】

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液(NΑP)

【包装规格】

5 Tests 20Tests100Tests

【预期用途】

供骨髓细胞涂片及血液细胞涂片作染色检查。

【检验原理】

本染色方法为偶氮偶联法,在pH9.29.8 的碱性环境下,细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚ΑS-BI 水解,生成α-

萘酚,再以稳定的重氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀,定位于细胞浆中。

【主要组成成份】

组成                                          主要成份

1、固定剂(Α                               甲醛

2、偶氮溶液(B                              FBB 

3、亚硝酸钠溶液(C                          亚硝酸钠

4、磷酸萘酚ΑS-BI 溶液(D                   磷酸萘酚ΑS-BI

5、核固红溶液(E                            核 固 红

【储存条件及有效期】

有效期:一年(十二个月)

储存条件:本试剂盒应贮存于28低温环境。

【样本要求】

新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片。

【检验方法】

一、工作液配制:

(一)浸染工作液配制 (一份浸染工作液量为43ml,至少可同时放置8-10 张涂片):

1、重氮盐溶液的准备: 1ml 1ml 彻底混匀,静置分钟;

2、染缸(自备染液缸)内加入40ml 蒸馏水;

3、将重氮盐溶液倒入染缸内,混匀。

4、再加1ml 入染缸内,轻轻混匀。

(二)滴染工作液配制(一份滴染工作液为2.15ml)

使用器材:一次性塑料试管、微量移液器、一次性吸嘴、滴管。

操作:取50μl50μl、混匀,静置分钟;再加蒸馏水2ml,加50μ混匀。

二、染色步骤:

1、干燥涂片,滴加Α 液固定涂片30 秒,蒸馏水冲洗,甩干;

2、滴加或浸入工作液15 分钟,蒸馏水冲洗,甩干;

3、E液(使用前请务必摇匀!)复染1~2分钟,蒸馏水冲洗,干后镜检。

4、计算积分:反应结果以积分值报告,油镜下计数100 个中性杆状核、分叶核粒细胞,分别记录其分级情况,所有阳性细胞积分相加即为积分。

【参考范围】

阳性反应主要见于成熟中性粒细胞(杆状及分叶核粒细胞)中,健康成人一般的中性粒细胞碱性磷酸酶积分值为13130,但各个实验室条件各异,实验室应有自己的参考值。

【检验结果的解释】

NΑ阳性颗粒为蓝色。

判断标准:

-分:细胞浆中无阳性染色颗粒。

+分:细胞浆中含少量颗粒或呈弥漫浅蓝色。

++分:细胞浆中含中等量的颗粒或呈弥漫蓝色。

+++分:细胞浆中含较多颗粒或呈弥漫较深蓝色。

++++分:细胞浆中充满粗大颗粒或呈弥漫深蓝色。

【检验方法的局限性】

仅限于形态学染色观察使用。

【注意事项】

15Tests 只限滴染使用。

2、使用前应恢复室温,用前请摇匀试剂;B液请充分混匀,所用容器必须洁净,工作液颜色为金黄色。

3、应采用新鲜涂片做NΑ染色,放置过久则酶的活性会降低。

4、工作液配制后应在10 分钟以内使用。

5、需用感染发热病人或正常人外周血涂片作为阳性对照。

6、每次试剂使用后,请迅速盖好密封保存,以免挥发及影响效果。

7、本品应由专业人士使用及进行结果的判读。

8、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识,在有效期内使用,并做好个人卫生防护。

9、生产批号、效期见外包装。

10、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。

【参考文献】

1、中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程〔M.南京:东南大学出版社,2006

2Gradwohl’s Clinical Laboratory Methods And Diagnosis,8th ,ed.

3、参考标准: Histochemical Method for Leukocyte Alkaline Phosphatase H22-P, Vol 4, No. 14, National Committee for

Clinical Laboratory Standards